分光光度計對土壤*磷的測定

      一、前沿掌握比色法測定土壤*磷的方法，了解土壤中磷素形態(tài)及其土壤供磷能力與土壤*磷的關(guān)系。掌握土壤*磷的浸提，浸提液的處理，標(biāo)準(zhǔn)曲線制作，顯色，比色，計算。

      二、內(nèi)容與原理酸性土壤中的磷主要是以Fe—P，A1—P的形態(tài)存在，利用氟離子在酸性溶液中絡(luò)合Fe3 和Al3 的能力，可使這類土壤中比較活性的磷酸鐵鋁鹽被陸續(xù)活化釋放，同時由于H 的作用，也能溶解出部分活性較大的Ca—P，然后用鉬銻抗比色法進行測定。

      三、主要儀器及試劑配制儀器：塑料杯，往復(fù)式振蕩機，分光光度計或光電比色計試劑： （1）0.03molL-1NH4F—0.025 molL-1HCl浸提劑稱取1.11克NH4F溶于800毫升水中，加1.0molL-1HCl25毫升，然后稀釋至1升，貯于塑料瓶中，其它試劑同前法。

      （2）鉬銻抗試劑 稱取酒石酸銻鉀（KSbOC4H4O6）0.5克，溶于100毫升水中，制成5％的溶液。

      另稱取鉬酸銨20克溶于450毫升水中徐徐加入208.3毫升濃硫酸，邊加邊攪動，再將0.5％的酒石酸銻鉀溶液100毫升加入到鉬酸銨液中，zui后加至1升，充分搖勻，貯于棕色瓶中，此為鉬銻混合液。

       臨用前（當(dāng)天）稱取1.5克左旋抗壞血酸溶液于100毫升鉬銻混合液中，混勻。此即鉬銻抗試劑。（有效期24小時，如貯于冰箱中，則有效期較長。）

       （3）磷標(biāo)準(zhǔn)溶液稱取0.439克KH2PO4（105℃烘2小時）溶于200毫升水中，加入5毫升濃H2SO4，轉(zhuǎn)入1升量瓶中，用水定容，此為100 mgkg-1磷標(biāo)準(zhǔn)液，可較長時間保存。取此溶液稀釋20倍即為5 mgkg-1磷標(biāo)準(zhǔn)液，此液不宜久存。

      四、操作方法與實驗步驟1、稱取通過1毫米篩孔的風(fēng)干土樣品5克（到0.01克）于150毫升塑料杯中，加入0.03molL-1NH4F—— 0.025 molL-1HCl浸提劑50毫升，在20—30℃條件下振蕩30分鐘，取出后立即用干燥漏斗和無磷濾紙過濾于塑料杯中，同時作試劑空白試驗。

       2、吸取濾液10—20毫升于50毫升容量瓶中，加入10毫升0.8M H3BO3，再加入二硝基酚指示劑2滴，用稀HCl和Na0H液調(diào)節(jié)pH至待測液呈微黃，用鉬銻抗試劑5毫升顯色，并用蒸餾水定容，搖勻，在室溫高于15℃的條件下放置30分鐘，用紅色濾光片或660nm波長的光進行比色，以空白溶液的透光率為100（即光密度為0），讀出測定液的光密度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出顯色液的磷濃度（mgkg-1）。

      3、標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：吸取含磷（P）5mgkg-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1、2、3、4、5、6毫升，分別加入50毫升容量瓶中，加入10毫升0.8M H3BO3，再加入二硝基酚指示劑2滴，用稀HCl和Na0H液調(diào)節(jié)pH至待測液呈微黃，再加入鉬銻抗顯色劑5毫升，搖勻，定容即得0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mgkg-1磷標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，與待測溶液同時比色，讀取吸收值，在方格座標(biāo)紙上以吸收值為縱座標(biāo)，磷mgkg-1數(shù)為橫座標(biāo)，繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

      五、作業(yè)根據(jù)以下公式計算土壤中*磷的含量 顯色液磷mgkg-1數(shù)×顯色液體積×分取倍數(shù) 土壤中*磷mgkg-1＝—————————————————――――――――————————— 烘干土重（克）

       顯色液磷mgkg-1數(shù)：從工作曲線查得顯色液的磷mgkg-1數(shù) 顯色液體積：50毫升 浸提液總體積（50毫升）

      分取倍數(shù)＝————--------————————— 吸取浸出液毫升數(shù)六、參考指標(biāo) 土壤*磷 　 mgkg-1等級 ＜3 很低 3—7 低 7—20 中等 >20 高